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实验笔记丨CRISPR-dCas9实验步骤详解

载体酶切 准备灭菌的PCR离心管，配制酶切体系，放置PCR仪，孵育3小时，终止酶切后使用1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。琼脂糖凝胶DNA回收 将吸附柱置于收集管中，加入Buffer BL，离心活化硅胶膜；在紫外灯下，用刀片切下目的条带，尽量去除非目的DNA，确保体积最小。

sgRNA长度：SpCas9一般为20nt。 sgRNA序列碱基组成：基因特异的sgRNA模板序列位于PAM序列前，PAM序列特征为NGG （N为任意核苷酸），选择3末端含有GG的sgRNA，可构成PAM序列。sgRNA序列应避免以4个以上的T结尾，GC含量最佳为30%-70%（40%-60%）。

实验流程介绍 天然的CRISPR-Cas9系统由三部分组成：SpCas9 （简称Cas9）、crRNA、tracrRNA。tracrRNA（在CRISPR-Cas9编辑技术中被优化并命名为gRNA scaffold），它负责与Cas9结合，与重复序列具有同源性。crRNA为引导序列，约20个碱基，具有特异性。

前阵子才写道 ： CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 Month 4 --可能的收官之帖（但还远未结束） 说自己收官之作，哪里想到这么快就要继续开始新的实验了。

如何把淘宝的黑号变白号了?

1、商家需要详细查看淘宝规定，找出可能触发黑号的违规行为，并进行整改。提供证明材料： 商家可以准备相关证明材料，如商品真实性证明、售后服务证明等，向淘宝客服提交，以证明自己的经营行为是合法的。与客服沟通： 主动与淘宝客服取得联系，说明整改情况，提供证明材料，并请客服协助尽快解封账号。

2、淘宝黑号变白的方法并不固定，因为淘宝的系统算法和规则随时在变化。但通常，要洗白一个淘宝黑号，用户需要改善自己在淘宝平台上的行为，提升信用度，并尝试与淘宝客服沟通解决问题。以下是一些建议性的步骤：首先，用户应该检查自己是否存在违规行为。

3、淘宝黑号转白号的方法其实挺简单的，就是不要参加或者违法活动，然后正常购物，一年之内就可以转白。淘宝黑号官方是没有具体规定的，如果想要恢复需要一系列操作，一般情况下黑号是无法进行恢复的。淘宝变成黑号后，无法领取优惠券，秒杀活动也无法参加，积分也会变得比较少。

淘宝白黒号是什么意思?黑号有何影响?

1、淘宝白号就是注册出来之后没有买过东西的，也就是没有点数的号，一般买过东西之后得到卖家的好评之后就会有点数，那个时候就已经不是白号了，白嘛就是干干净净的那种，但是现在的意思有点不一样，好像只要不是1心的都叫做白号吧。黑号：所谓黑号，在淘宝官方并没有这一规则和定义。

2、淘宝白号是指淘宝账号的一种状态，即该账号没有任何违规记录，权重较高，可以享受淘宝平台的一些优惠政策和服务。淘宝白号与黑号相对，黑号通常是因为账号存在违规行为，如刷单、恶意评价、售假等行为，被淘宝平台标记并限制其部分功能或降低其权重。

3、淘宝黑号就是：购买记录很异常，突然一个月暴涨了很多消费，而且购买的东西都是很混乱的，和小号标签根本匹配不起来，所以淘宝黑号就会被淘宝监控，数据异常，淘宝就会判定是虚假交易的。跟星级没有直接的关系的。淘宝小号分成黑号和白号。

4、淘宝白号就是没有购买、信誉、实名的账号。黑号就是频繁参与虚假交易、钻淘宝系统bug、退款、购买白菜单等等，导致被淘宝监控的账号。

5、淘宝黑号指的是那些因频繁违规操作而导致账号异常的用户。这类用户会遇到无法获取优惠券、无法参与促销活动等麻烦。值得注意的是，目前淘宝官方并没有明确的规定和定义来界定黑号。对于轻微违规的用户，淘宝会给予恢复机会；而对于严重违规的用户，其账号将永久无法恢复，并且无法进行正常的商品购买。

6、淘宝黑号是指被淘宝处罚过虚假交易的，狂刷号（刷过很多次的账号）。在淘宝官方并没有这一规则和定义，是淘宝用户自己发现并定义的，就是指在淘宝站内出现的账号不正常现象，无法正常领券和享受优惠等。正常号就是正常购物号，没有被处罚过的淘宝号。

几号白露2023

年白露时间回收vx秒结白号：9月8日05：26：31回收vx秒结白号，星期五，农历七月廿四。回收vx秒结白号我国古人根据对大自然回收vx秒结白号的观察，将白露分为三候：“一候鸿雁来，二候玄鸟归，三候群鸟养羞。”意思是说这个节气，鸿雁与燕子等候鸟南飞避寒，百鸟开始贮存干果粮食以备过冬。这会儿农民也忙着收获庄稼，正所谓“抢秋抢秋，不抢就丢”。

年白露时间：9月8日5点26分31秒，星期五，农历七月廿四。白露基本结束回收vx秒结白号了暑天的闷热，天气渐渐转凉，寒生露凝。古人以四时配五行，秋属金，金色白，以白形容秋露，故名“白露”。白露三候我国古代将白露分为三候：“一候鸿雁来；二候玄鸟归；三候群鸟养羞。

年白露时间：9月8日5点26分31秒，星期五，农历七月廿四。白露，是“二十四节气”中的第15个节气，秋季第3个节气，“白露”是反映自然界寒气增长的重要节气。由于天气逐渐转凉，白昼有阳光尚热，但傍晚后气温便很快下降，昼夜温差大。

年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。白露代表天气渐渐转凉。白露是一个反映自然界气温变化的重要节令，基本结束了暑天的闷热，是秋季由闷热转向凉爽的转折点。古人以四时配五行，秋属金，金色白，故以白形容秋露。

年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。白露节气的含义是表示孟秋的结束，仲秋的开始，夏日残留的暑气逐渐消失，天地的阴气上升扩散，夜晚渐凉，昼夜温差拉大，寒生露凝，这是“白露”名由之一。白露是反映自然界寒气增长的重要节气。

今年几月几号白露2023

1、年白露时间：9月8日5点26分31秒，星期五，农历七月廿四。白露基本结束了暑天的闷热，天气渐渐转凉，寒生露凝。古人以四时配五行，秋属金，金色白，以白形容秋露，故名“白露”。白露三候我国古代将白露分为三候：“一候鸿雁来；二候玄鸟归；三候群鸟养羞。

2、年白露时间：9月8日5点26分31秒，星期五，农历七月廿四。白露，是“二十四节气”中的第15个节气，秋季第3个节气，“白露”是反映自然界寒气增长的重要节气。由于天气逐渐转凉，白昼有阳光尚热，但傍晚后气温便很快下降，昼夜温差大。

3、年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。白露节气，大部分地区温度降低。白露是秋天的第三个节气，表示孟秋时节的结束和仲秋时节的开始。这时，人们就会明显地感觉到炎热的夏天已过，而凉爽的秋天已经到来了。

4、年白露时间：9月8日05：26：31，星期五，农历七月廿四。白露代表天气渐渐转凉。白露是一个反映自然界气温变化的重要节令，基本结束了暑天的闷热，是秋季由闷热转向凉爽的转折点。古人以四时配五行，秋属金，金色白，故以白形容秋露。